細胞外小胞(EV)分離の決定版!qEV Gen2を知る

qEV Gen 2(第2シリーズ)は、最先端のサイズ排除クロマトグラフィーカラムで構成されています。
EV分離における効果を高めるために、細胞外小胞 (EV) の分離用に特別開発された次世代高性能樹脂で作られています。qEV Gen2は、6種類のカラムサイズを展開しており、さまざまなサンプル量に合わせて最適化されています。この多様性により、qEV Gen 2 カラムは、診断や治療のための基礎研究にわたる EV 分離のための強力な基盤を提供できます。

qEV Gen 2 カラムの利点

qEV Gen 2 カラムは、qEVの分離システム SEC(EVのサイズ排除クロマトグラフィー)を利用して、効果的に可溶性タンパク質から EV を分離できます。qEVカラムをオートフラクションコレクター(AFC)と⼀緒に使⽤すると、効率、再現性がさらに向上します。
qEV カラムは、EV 分野全体で広く採用されるようになり、2015 年~2021 年にかけて650 以上の出版物で使⽤されています。(下図)

細胞外小胞の研究を加速させるqEV抽出

qEV細胞外小胞抽出キットの文献数推移
qEVの⽂献数推移
2014 年〜2021年までに公開された⽂献数をまとめたグラフ

qEV カラムは、2015 年~2021 年にかけて650 以上の出版物で使⽤されています。

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qEVは使用者のニーズに合わせて、最適なサイズを選択いただけます

Gen 2 シリーズに特有の高性能樹脂の使用により、Gen 2 カラムは汚染した可溶性タンパク質を約 99% 除去し、高度に精製された EV 含有分離物を提供します。

qEV Gen 2 シリーズには 6 つのカラム サイズがあり、EV-RNA 分析専用の血液サンプルの貴重な部分から大量の細胞培養培地まであらゆるものに対応します。各カラムの寸法と機能は、さまざまなサンプル負荷量から EV を分離できるように最適化されています。
血漿、血清、細胞培養培地の一般的なサンプル タイプに加えて、乳、脳脊髄液、尿、生殖液などの他の幅広い生体液から EV を分離するために使用されています。

また qEV Gen 2カラムは 、35 nm / 70 nmの 2 つの範囲で利用可能です。
35 nm シリーズのカラムは、小型 EV の回収率が高くなりますが、スケールの小さい端での回収率の向上と引き換えに、より多くのタンパク質の重複が生じます。
一方、70 nm シリーズは、より EV 回収率が高く、タンパク質汚染が少なくなります。

分離の改善により、柔軟性と選択肢が増えることを意味します

qEV Gen 2範囲の分離が向上したことにより、どの精製収集量 (PCV) を収集するかを決定する際の制御レベルが向上しました。
下図 が示すように、抽出プロファイルを十分に研究した場合 (および、血漿サンプルのユーザーマニュアルの推奨事項に従った場合)、EV を含む分離株のさまざまな部分を収集して、EV の濃度、回収率、純度を優先することができます。デフォルト値は、EV の回収率と純度のバランスを提供します。

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qEV Legacy(第1世代)は2023年末販売終了となります

Gen 2 シリーズの開発は、EV ベースの臨床アプリケーションの導入を促進するために、可能な限り最高の EV 隔離ソリューションを提供するという Izon の献身的な取り組みを反映しています。qEVsingle Gen 2、qEVoriginal (図 4)、qEV1、Gen 2 qEV2 、Gen 2 qEV10、およびGen 2qEV100の純度の向上によって測定されるように、レガシーよりも Gen 2 のパフォーマンスが向上したことにより、Gen 2 の採用が急速に進んでいます。カラム – フィールドにおけるサンプル純度の重要性を強調します。

Gen 2 カラムは、「レガシー」カラムとして名前変更された元の qEV 範囲に置き換わります。qEV Legacy(第1世代)は 年末に生産終了となります。

左図:オートフラクションコレクター(AFC)で分離した、ヒト血漿サンプルのプール容量 (2 mL) に存在するタンパク質です。ロードされた総タンパク質の%として表示されます。タンパク質はビシンコニン酸アッセイにより測定した。70 nm シリーズおよび 35 nm シリーズの qEV original Legacy カラムおよび Gen 2 qEV original カラムのデータを示します。 (ロード容量 0.5 mL)

右図: ナノ粒子マルチアナライザー (Exoid) およびビシンコニン酸アッセイでそれぞれ測定した、タンパク質 1 μgあたりの細胞外小胞 (EV) の数量です。70 nm および 35 nm シリーズの オートフラクションコレクター(AFC)および qEV original カラム (ローディングボリューム 0.5 mL) を使用して分離されたヒト血漿サンプルのデータが示されています。

以下が示すように、バッファー ボリュームと精製コレクション ボリュームは qEV Gen 2 とqEV Legacyで異なるため、EV のかなりの部分が失われる可能性があります。
qEV Gen 2 ユーザー マニュアルで正しいプロトコルに従っていることを確認することが重要です。

バッファー量精製コレクション量
Gen2LegacyGen2Legacy
35nm70nm35nm70nm35nm70nm35nm70nm
qEV single0.87mL0.8mL1mL0.68mL
(4×0.17 mL)
0.6-0.8mL
qEV
original
2.9mL2.7mL1.6mL
(4×0.4 mL)
1.5mL
qEV 14.7mLN/A2.8mL
(4×0.7 mL)
N/A
qEV 217.9mL17.2mL14.1mL8mL
(4×2 mL)
8mL
qEV 1023.2mL22.9mL21.4mL20mL
(4×5 mL)
20mL
Gen2(第2世代)とLegacy(第1世代)におけるバッファー量と精製コレクション量の比較

※Gen 2 カラム (ヒト血漿) からの溶出プロファイルは、EV の純度と回収率のバランスを提供するデフォルトのバッファー量を特定できるように特徴付けられています。このデフォルトのバッファー量は、別途指定する「バッファー量」とは異なります。デフォルトのバッファー容量とデフォルトの精製コレクション容量は、オートフラクションコレクター(AFC)にプログラムされています。

qEV分離プラットフォームはEV研究の強力な基盤となります

qEV Gen2 カラムの簡便で迅速な性質により、qEV分離は最も⼀般的なEV分離⽅法の1つです。qEVカラムをオートフラクションコレクター(AFC)と⼀緒に使⽤すると、効率、再現性がさらに向上します。
また、qEV Legacyシリーズと比較して Gen 2 カラムの分離が強化されているため、純度が向上するだけでなく、さまざまなサンプル組成に優先順位を付ける柔軟性も向上します (図 3)。

元の qEV 範囲は当初、調整可能な抵抗パルス センシング測定により高いレベルのサンプル純度を提供するために確立されました。, qEV カラムは、幅広いアプリケーションやワークフローで広く使用されています。さらに、qEV カラムから分離された EV は、タンパク質または RNA 分析の準備として、qEV 濃縮キットを使用して濃縮できます。一方、qEV RNA 抽出キットは、EV-RNA 分析のためのサンプル調製をさらに合理化するのに役立ちます。

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