EV, LNP解析用試薬キット

細胞外小胞(EV)研究ワークフローの各ステップを改善

EVの研究では、まず生物学的サンプルからの正確で効率的な分離が不可欠です。純度と一貫性を確認するために、EVの特性評価と定量が行われます。その後、機能アッセイによって生物学的活性が評価され、治療の可能性が探求されます。この複雑な過程で、革新的な製品が重要な役割を果たしています。

EVの分離、特性評価、取り込みアッセイ技術におけるワークフロー

VRef-63GFP（リファレンスEV CD63-GFP）は、EVの特性評価のための直交分析法の検証に役立ちます。染料で標識した後のサンプルを、VSEC-35(遠心分離SECカラム)を使って、損失や希釈なしでクリーンアップすることもできます。
これらの信頼性の高いソリューションにより、EV研究の効率と信頼性を大幅に向上させ、このダイナミックな科学研究分野の進展を加速しています。

LNP、ナノメディシン、遺伝子治療ベクターの可能性を拡大

分析プラットフォームの機能を強化し、サンプル準備を改善することで、LNP、ナノメディシン、遺伝子治療ベクターの開発をより迅速かつ効率的にできます。

最先端のツールと専門知識を提供することで、これらの分野の発展において中心的な役割を果たし、革新的な治療法の開発を加速させることを目指しています。

EV、ナノ医療、バイオナノ粒子研究に向けた、幅広いラインナップ

VSEC-35　遠心分離SECカラム(24本入り)　ポアサイズ35nm

• 分析前のサンプルクリーンアップのための
  サイズ排除クロマトグラフィースピンカラム
• 1000 xg / 1min の低速遠心
• サンプル 50 ～ 100 µL、
  2 mL コレクションチューブ形式
• 35nmサイズ排除
• 細胞外小胞(EV)やLNPなどのバイオ粒子サンプルから余分な蛍光色素と抗体、及び汚染物質を除去

収量と感度のどちらかを選択する必要はもうありません

Core-Sep 固定相により遠心 SEC が可能になりました。
遠心力の使用に適した物理的特性を備えた独自のゲル Core-Sep を使用しています。40µm ～ 70µm のビーズと 30nm ～ 40nm の細孔サイズを備えた Core-Sep は、細胞外小胞（EV）、OMV、レンチウイルス、アデノウイルス、リポソーム、LNP などのナノ粒子サンプルから小分子や生物製剤の汚染物質を除去するのに理想的なパフォーマンスを提供します。
VSEC-35(遠心分離SECカラム)は、次の技術を使用して分析前のサンプルのクリーンアップに使用できます。

■VSEC-35(遠心分離SECカラム)　仕様

VSafe-5 / VSafe-10 EV保存用バッファー（5/10mL）

• 細胞外小胞(EV)の保存及び処理バッファー
  （VSafeはEV を安定化するように特別に設計されたバッファーで、EVの構造と生物学的活性を長期にわたり維持します。）
• 凍結保管や長時間のベンチワークでも品質を損なうことがない為、ダウンストリーム解析や細胞への取込みなどに役立ちます。
• 効率性は5年以上にわたって
  証明されています
• Vesiculab による独自のライセンスを
  取得しています
• カロリンスカ研究所が開発した試薬です

24時間以上の安定性

実証された効率性

EV 研究で一般的に使用される PBS などの緩衝液は、サンプルの損失や EV 回収率の低下につながります。

希釈時の安定性

VSafe（EV保存用バッファー）は、希釈によるEVの損失なしにアッセイを実施することができます。
下図は、VSafe（EV保存用バッファー）がPBS中のEVにプラスチック吸着により発生するEV損失を防ぐことを示しています。

分離後すぐに EV を保存
分離後すぐに細胞外小胞を安定化させることは、その完全性と機能性を維持するために重要です。EV は微小環境の変化に非常に敏感で、適切なバッファーに保存しないと特性が急速に劣化する可能性があります。分離後すぐに EV を生理学的強度の環境に保つために PBS がよく使用されますが、凍結保存にもベンチワークにも不十分であることがわかっています。
VSafe（EV保存用バッファー）は、保管と操作の両方の要件において EV を安定化および保存するための最高のパフォーマンスを発揮するように開発されました。
サイズ排除クロマトグラフィー後の希釈サンプルで 10 倍、 UC ペレットまたは TFF 濃縮物を再懸濁するために 1 倍の濃度に希釈して使用できます。

■ VSafe(EV保存用バッファー) 仕様

VRef-63GFP　リファレンスEV CD63-GFP

• 分析および機能アッセイにおけるポジティブコントロール用のリファレンス製品
• HEK から分離された EV は、実際のサイズ分布とバイオマーカーを提供します
• 直交検証プロセスの一部として複数のプラットフォームで使用可能です
• CD63-GFP+で蛍光ベースのアッセイの検証が可能です

サイズと濃度の測定

EVはサイズ分布が広く評価が困難になる可能性があります。長時間のセッションに着手する前に、VRef-63GFP(リファレンスEV CD63-GFP)のアリコートを実行して出力を確認してください。サイズ分布が切り捨てられている／公称範囲内にない場合、または粒子濃度が過剰／不足している場合は、取得パラメータを調整してください。

蛍光標識による表現型解析

蛍光検出の感度を評価することは非常に重要です。シグナルの過少または過剰表現は測定の失敗につながる可能性があります。
VRef-63GFP（リファレンスEV CD63-GFP） の強力な GFP シグナルにより、蛍光検出の感度を制御できます。

■VRef-63GFP（リファレンスEV CD63-GFP）　仕様

VRef-63mNG　リファレンスEV CD63-mNG(100µL)

• CD63 テトラスパニタンパク質の存在下で蛍光タンパク質のmNeonGreen を発現するように設計された、
  HEK 293 細胞から得られた細胞外小胞分離物です。
• GFPの3倍明るく退色が少ないため、
  共焦点顕微鏡や超解像顕微鏡に適しています。

■VRef-63mNG仕様

VFc-mNG　Fc結合EV-mNG(100µL)

• カロリンスカ研究所のSamir EL Andaloussi 氏が開発した
  エンジニアリングEV
• ベシクル内部にmNeon Green蛍光、
  表面にFc結合部分が存在します
• Fc部分に結合するように設計された細胞外小胞であり、
  様々な抗体を修飾することが可能です。
• 抗体 NP 複合体の治療効果を評価するために使用可能です
• 分析: ナノフローサイトメトリーで 2 色のシグナルを
  提供します
• VRef-63mNG(リファレンスEV CD63-mNG)と連携して
  動作します
• VSafe(EV保存用バッファー)で懸濁しています

VFc-mNG（Fc結合EV-mNG(100µL)） を使用すると、次の実験が可能になります。

• 抗体修飾EVの受容細胞への結合効率の迅速な評価
• LNPおよびナノ医薬品候補の開発のためのモデリング
• ナノ粒子分析および超解像顕微鏡プラットフォームにおける効率的な共局在実験
• 2つの蛍光チャネルでの（ナノ）フローサイトメトリー測定のポジティブコントロール

モノクローナル抗体による EV 表面の迅速な機能化

VFc-mNG（Fc結合EV-mNG) は抗体の Fc 部分に結合するように設計された細胞外小胞であり、可変領域を抗原認識のために表示できるようにし、さまざまな種類の抗体で装飾できます。したがって、これらの Fc 結合 EV は、実質的に任意の組織 (より正確には抗原) を対象とすることができます。

さらに、それらは腔内 mNeonGreen 蛍光シグナルを表示し、取り込みおよび機能アッセイのレポータータンパク質ドメインとして使用できます。

抗体結合の特異性（EV特性/蛍光およびFc結合機能の評価）

VFc-mNG（Fc結合EV-mNG) はhIgG1-APC抗体に結合しますが、VRef-63mNG(リファレンスEV CD63-mNG)は結合しません。

柔軟な EV 共局在実験
未知の EV サンプルの共局在は、準備と免疫標識のステップの難しさを考えると、実行が困難な場合があります。VFc-mNG(Fc結合EV-mNG)は、FITC チャネル (励起 488 nm、発光 525 nm) で蛍光を発する細胞外小胞の蛍光源を提供するほか、一次結合 Fc 抗体による機能化による第 2 の色も提供します。

フローサイトメトリー測定の標準化のための信頼性
ナノフローサイトメトリーは現在、テトラスパニン (CD9、CD63、CD81) などの特定のバイオマーカーの存在が陽性の粒子の定量化を含む細胞外小胞の特性評価に広く使用されています。EV のように小さな粒子の検出に対する分析機器の感度を評価することは、その小さな光学半径と低密度のため、常に課題となっていました。実際の EV 分離物である VFc-mNG(Fc結合EV-mNG) は、2 つ以上のチャネルでの蛍光とともに必要な光学特性を提供し、EV への抗体の結合を研究するための新しい多目的リファレンス物質として機能して、EV 作業用の強力なフローサイトメーターとソーターの微調整を可能にします。

ベンチでも冷凍庫でも安定
EVはプラスの温度にさらされると急速に分解することが知られており、短期プロジェクトや分析に支障をきたします。VSafe(EV保存用バッファー)で安定化されているため、VFc-mNG(Fc結合EV-mNG)は、－80°C ～－20°C で長期間安全に保管でき、インキュベーションや分析中の動作温度でも目立った劣化なく保管できます。

■ VFc-mNG(Fc結合EV-mNG) 仕様

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